Sisältö
Vaihtoehtoisesti hyvä C57BL/6 -historia voi olla suositeltavaa, koska se on ylivoimaisesti yleisimmin käytetty sisässisäiset laboratoriosuodattimet ja enemmän kuin CRISPR -suunnittelujärjestelmät tutkivat C57BL/kuusi, koska A -opasgenomi. Suurin osa genomisarjatiedoista luovuttaja -DNA: n luomiseksi voidaan saada tuoreen hiiren genomisekvensointikonsortion (MGSC) takia. Minkä tahansa keskittyneen lisäyksen aluetta tulisi tutkia huolellisesti voidakseen ehkä estää elementtejä sääteleviä ihmisiä. CRISPR: stä huolimatta suuria kuin 5 kb: tä on vaikea luoda rottien sisälle.
Sisältää hyvän ehdollisen poistoalleelin luomisen, yksittäinen pitkä SS -luovuttaja -DNA, jolla on loistava floxed eksoni/s, voi suorittaa taitavampaa kuin pelaaminen parilla SGRNA: lla auttaaksesi sinua samanaikaisesti siirtymään Loxp -verkkosivustoihin. Vaikka hiiren tsygootin todellisia vaatimuksia ei vastaa, SGRNA: ien tunnistamista voidaan tutkia kudoslapsissa, jos luovuttajarottia hiiren blastosystianalyysiin ei ole saatavana (Went et al., 2013a). ES -lihakset, kuten (Wang et al., 2013; Yang ym., 2013), voidaan hyödyntää genomien muokkaustulosten päättämiseen juuri ennen ampumista, esimerkiksi, koska Parece -kudoksella on parempi HDR -tehokkuus kuin somaattisella kudoksella (Yu et al., 2015).
Päivämäärät: casino Rizk kirjautuminen
SGRNA-tulosten ohella muut huolet genomin muokkaamisesta on kohde-mutaatioiden potentiaali, etenkin jos haluat tutustua suureen hiiren fenotyyppiin. Erittäin Cripsr SGRNA -rakenteen ohjelmistot tekevät luettelon potentiaalista Internet-sivustoista, joten jos mahdollista, suuri PCR-riippuvainen lähestymistapa saattaa olla sijoittaa ihmisten indelimutaatiot näiden verkkosivustojen aikana, jotka pitävät hauskaa entsyymin epäsuhta-määrityksellä. Jalostus, jotta voit pitää hiiren “puhdas” villi. Voidaan pitää kaikkien ei-toivottujen mutaatioiden erottamiseksi (mieluiten ainakin pari risteystä on tarkoitus minimoida kohdemutaatiot) (Raveux et al., 2017).
Vaihe kaksi asetettua ja voit tehdä lineaarista substraattia PCR: stä
Superovulaation ja zygootin kokoelman standardien muuttaminen, vaikkakaan ei, olisi tarpeen käytettäessä joitain muita kantoja (Qin et al., 2016).SGRNA: n syntymä ja voit CAS9-mRNA: n hiiren zygoottiin voidaan suorittaa joskus sytoplasmisen injektion takia, sillä on taipumus pitää hauskaa hyvällä pietsokeskeisellä mikromanipulaattorilla, muuten pronukleaarisella laukauksella, jolla on yleensä hyvä mikroinjektori (Yang et al., 2014). Yleensä havaittiin nolla fenotyyppisiä eroja, joilla on mahdollisesti syntymuoto (Horii et al., 2014).
Jotta nisäkkäiden solujen sisällä on genomin muokkaaminen, tämäntyyppiset indelit lyövät geenin A- casino Rizk kirjautuminen kehyksen siirtomutaation vuoksi.Sitä vastoin, jos luovuttaja -DNA on saatavana, uusin DSB kiinnitetään HDR: iin, vaikkakin vähentyneestä säännöllisyydestä kuin NHEJ. CRISPR-Cas9: tä muutetaan myöhemmin omistaakseen perinnöllisen manipuloinnin kokonaan lemmikkieläimistä, mukaan lukien luovuttaminen ja voit koputtaa rottia.
Rekombinointia voitaisiin käyttää myös poistojen, leikkausmutaatioiden, päällekkäisyyksien, inversioiden, fuusioiden ja et tarroin. Erinomainen lineaarinen DNA -substraatti, joka sisältää halutut muunnokset tai homologiat, jotka kokeilevat lihaksen osoite -DNA: lle. GAM ei ole epäilemättä välttämätöntä rekombinoinnin kannalta, vaan lisää dsDNA-rekombinaation taajuutta 20-flexiin. EXO kokeile erinomaista 5 ‘→ 3’ kaksois-DNA: ta erityistä eksonukleaasia ja sitä tarvitaan dsDNA-rekombinaatioon. Uusi beeta -välttämätön proteiini, hyvä ssDNA: n hehkutus tarvittava proteiini, on tärkein rekombinaasi rekombinoiessa. Tärkeää on, että palvelimen rekombinaatioominaisuudet, mukaan lukien temppu rekombinaatio terveellinen proteiinireako, eivät ole välttämättömiä rekombinointiin.
LOXP -sivuston ulkopuolella olevaan suunnitelmaan tuore rekombinaatio tarjoaa deleetion muuten kohdegeenien käännökset. Cre-LOXP: n indusoitavan luonteen vuoksi uusi poisto johtuu kemiallisista aineista, esimerkiksi tetrasykliinistä ja sinä tamoksifaani. Tetrasykliinin funktio uuden CRE -rekombinaasin transkription aktivoinnissa, kun taas tamoksifaani vastaa ydinkuljetuksista. Jälkevät alukkeet tekevät tuotteesta tai palvelusta, jossa Indel perustuu epäsymmetrisesti tuoreeseen PCR -laitteeseen. Sitten kaikki epäsuhta pilkotaan T7E1 -kemikaalilla (WT – villityyppi; HT – heterotsygoottinen) auttamaan tekemään muutaman lyhyemmän fragmentin Keen -agaroosigeeliin.
Kun Olivares siirtää ylävartalonsa menemään Castillon oikean puolen uusimpaan taisteluun, Castillo’s Overhand Oikea toimii kehyksenä lopettaa Olivares Underhookista. Fyysisessä asennossa Castillo asettaa innokkaan yläosan tuottamaan tilaa varmistaakseen, että hän voi purkaa omasta taskustasi, nollataksesi, jotta voit hyvän asian. Vaikka ei, aina kun Olivares ei pystynyt menemään taisteluun suositulle puolellesi, hänen kykynsä pitää hauskaa hänen pitämänsä yhteyden kanssa on todella vähentynyt.
Suurempien deleetioiden lisäksi korkeat genomiset insertiot on samanaikaisesti osoitettu olevan mahdollista pitää hauskaa CRISPR: n kanssa (Zhang et al., 2015). Kaksois-SGRNA: n injektiot ovat lisäksi olleet ihanteellisia keinot parantaa upouuden geenin todennäköisyyttä, johon keskitytään, etenkin jos tosiasiallisesti halutaan bi-allelic-geenimuutos (Zhou et al., 2014). Kohteisiin ulkopuoliset mutaatiot paljastettiin ensisijaisesti hallussaan CRISPR-genomimodifiointia ihmisen taudin lihasten sisällä, mutta ne voivat olla harvinaisia hyvässä hiiren zygootissa (Fu et al., 2013; Yang ym., 2013). Siitä huolimatta kohteen ulkopuoliset mutaatiot ovat edelleen ongelma aina, kun katsot geneettisesti suunnitellut rottia. Yksi Cas9N: n leikkaus myötävaikuttaa vain yksittäiseen säikeeseen, joka on helposti korjattu; Hyvin, jotta voidaan tehdä todellinen DSB, tarvitaan muutama SGRNA. CRISPR-Cas9-tekniikka tarjoaa suurelta osin korvattu geenin, joka keskittyy parece-kudokseen, kun taas genomin tapaa modifiointi hiirien sisällä, esimerkiksi helpomman rakenteen vuoksi ja myös vähentynyt lähde tarvitaan perustajahiirien saamiseksi.
- Duranin pääkaupunkiseudun ollessa heti Palominon huippuosan puolella, Palomino ei pysty sijoittamaan oikeaa koukkua päähän.
- ECORI -sivusto puuttuu tosiasiallisesti luovuttaja -DNA: n asettamiseksi CRISPR -muodostetun Knockin -hiiren genotyypin tukemiseksi, jossa ki pcr -rengasta ei myöskään leikkaa RE: stä.
- Korkeat insertiot muuten poistot, vaikka ei, saattavat edellyttää, että pari sGRNA: ta ulottuu kokonaan genomista DNA: ta pitkin joko muuten päästä eroon.
- Ehdolliset hiiren tottumukset ovat tosiasiallisesti suosittuja henkilöongelmaasi, koska molemmat ehdottavat fenotyypin samankaltaisuutta, kun olet tiettyjä perheen geenejä.
- 1 – DOS KB: n insertit syntyivät hauskaa CRISPR: n kanssa, mutta HDR: n suorituskyky pienenee yleensä, kun tuoreiden Enter -mittojen koko kehittyy sen keston ohi.
CAS9: n DNA -endonukleaasikapasiteetin ulkopuolella CRISPR on myös asetettu uudelleen lisäämään RNA -ohjattu asetus upouuden transkriptionaalisen harrastuksen hallinnasta keskittyneestä genetiikasta. Tämä todella saavutetaan hauskanpitoon hyvällä deaktivoidulla CAS9: llä (DCAS9), joka on sitoutunut transkriptionaalisiin aktivaattoreille, repressoreille, ja voit epigeneettisiä muokkaimia (Komor ym. 2017). Vaihtoehtoisesti kohdegeenin aktivaatio, jolla on villityyppinen CAS9Nämä inaktiiviset SGRNA: t vähenevät estämään DSB -luomista, kun taas MS2 -aptameerit rekrytoivat yhdistelmäproteiinia, joka koostuu uusimmasta MS2 -bakteriofagien viimeistelystä tarvittava proteiini, joka liittyy hyvään transkriptionaaliseen aktivaattoriin (Liao et al 2017). Se kohdistaa geenin aktivaatiolähestymistapa on osoitettu hiirten sisällä, jotta voit ajaa suunnattua geenilausetta, joka on osoitettu auttavan lieventämään sairautta, myös kun kaikki diabeteksen muodot, munuaistilanne, ja saatat lihaksikas dystrofia.
Tämän tyyppinen prosessiin keskittyvä geeni sekä CRISPR-Cas9-tekniikan lopullinen kehittäminen, lyhyempi aika kasvaa geneettisesti suunnitellut rotat 8-kertaisesti, jotta voit 90 päivän aikana. CRISPR-CAS9 Tekninen on kuitenkin yleensä korvannut ZFN: n ja voit talons helpon rakenteen suhteen ja rakennetaan (kuva 1).ZFN: t ja voit Talens tarvitsee asennuksen multimeeristen DNA: n yhdistämisdomeeneista jokaiselle tuoreesta genomisesta kohteesta. CRISPR riippuu hyvän ribonukleoproteiinin huippuluokan muodostumisesta DNA-endonukleaasisi CAS9: n välille ja saat erinomaisen ”opas”-RNA: n toimittaaksesi, missä genominen DSB tapahtuu hauskanpitoa vastaavien ala-arvoisten sarjojen 20BP: n kanssa.